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理论要点之免疫学:免疫学检测技术

一、血清学技术

(一)抗原抗体反应原理

1.特异性

2.亲和力(affinity)和亲合力(avidity)

3.可见性:可溶---沉淀/凝集

(二)沉淀反应(precipitation)

1.可溶性抗原与抗体反应形成沉淀物

2.单向免疫扩散(singleimmunodiffusion)

3.双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)

4.免疫电泳(immunoelectrophoresis)

(三)凝集反应(agglutination)

1.颗粒性抗原(细菌/红细胞)与抗体结合后形成凝集团块

2.直接凝集反应:ABO

3.间接凝集反应:用乳胶颗粒或红细胞包被抗原

(四)补体参与的反应

1.RBC+Ag,

2.Ab

3.C'---溶RBC

二、标记抗原或抗体的Ag-Ab反应

(一)免疫荧光法(immunofluorescence)

1.直接荧光法

2.间接荧光法

(二)酶免疫法(enzymeimmunoassay,EIA)

1.酶联免疫吸附试验(ELISA)

(1)双抗体夹心法

(2)间接法

(3)BAS-ELISA:生物素(biotin),亲和素(avidin)

2.酶联免疫斑点试验(enzyme-linkedimmunospotassay,ELISPOT)

3.免疫组化(immunohistochemistry)

(三)放射免疫(radioimmunoassay,RIA)

(四)化学发光法(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA)

(五)免疫印迹法(immunoblotting),WesternBlottingSDS-PAGE(HIV)

(六)免疫PCR(immuno-PCR,IM-PCR)

三、淋巴细胞分离及检测技术

(一)淋巴细胞的分离与类型鉴定

1.分离:

(1)密度梯度离心法,尼龙毛,抗CD3法,SRBC

(2)流式细胞术(flowcytometry)

(3)磁珠分离法

2.鉴定:

(1)免疫荧光法,磁珠法,淘选法,

(2)流式细胞术(flowcytometry)

(3)磁珠分离法

(4)荧光激活细胞分选器(fluorescenceactivatedcellsorter,FACS)

(五)抗原肽-MHC分子四聚体技术(avitin*--biotin-MHC/peptide)

(二)T细胞功能测定

1.T细胞增殖试验

3H-Tdr掺入法(胸腺嘧啶核苷)

MTT法(3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑)

(细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶的底物,形成蓝色甲臢颗粒,可被盐酸异丙醇溶解)

2.细胞毒试验

51Cr释放法(Na251CrO4标记靶细胞,测释放)

乳酸脱氢酶释放法(细胞膜损伤,释放)

凋亡细胞检查法

3.皮肤试验

(三)B细胞功能测定

1.B细胞增殖试验

2.抗体形成细胞测定,溶血空斑试验(hemolyticplaqueassay)

(四)吞噬细胞功能测定

1.趋化功能测定

2.吞噬功能测定

四、细胞因子检测

(一)生物活性测定法

(二)免疫学检测法(ELISA)

(三)DNA聚合酶链反应(PCR法)

(四)皮肤试验

五、疾病的诊断

(一)感染性疾病

(二)免疫缺陷病

(三)自身免疫病

(四)超敏反应性疾病

(五)肿瘤


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