试题解析：第5550题 - 执业医师考试在线测试

蛋白质的分离和纯化的方法有以下几种：
一、透析和超滤法 方法：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法叫透析（dialysis） 原理透析袋是用具有超小微孔的膜，如硝酸纤维素膜制成。微孔一般只允许分子量为10，000的化合物通过。蛋白质是高分子化合物故留在袋内，将盛有蛋白质溶液的透析袋至于水中，小分子化合物如硫酸铵、氯化钠等即透过薄膜，只要不断更换袋外水，就可将袋内的小分子物质全部除去。
二、丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀 盐析（salt precipitation）是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH均不同。例如血清中的白蛋白及球蛋白，前者溶于pH7.0左右的半饱和的硫酸铵溶液中，而后者在此溶液中沉淀。 其他两种方法不常考，在此不一一累述。
三、电泳 方法：蛋白质在高于或低于低于其pI的溶液中为带电颗粒，在电场中能向正极或负极移动，这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术，称为电泳（electrophoresis）。最常用的是薄膜电泳。
四、层析 原理：层析（chromatography）是蛋白质分离纯化的重要手段之一。一般而言，待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的额蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。层析的种类很多，有离子交换层析，凝胶滤过层析和亲和层析等。离子交换层析：蛋白质和氨基酸一样，是两性电解质，在某一特定的pH时各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。 凝胶滤过（gel filtration）又称分子筛层析，层析柱内填满带有小孔的颗粒，一般有葡聚糖制成。蛋白质溶液加于柱之顶部，任其往下渗漏，小分子蛋白质进入孔内，因而在柱中滞留时间较长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出，因此不同大小的蛋白质得以分离。
五、超速离心 超速离心既可用来分离传话蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。蛋白质在高达50万g（g为gravity，即地心引力）的重量作用下，在溶液中逐渐沉降，直至其浮力与离心所产生的力相等，此时沉降停止。